文章詳情
簡單介紹:
96T48T
96T48T
詳情介紹:
檢測原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯**吸附試驗(ELISA)。往
預先包被抗體的包被微孔中,依次加
入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并徹底洗滌。用底
物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用
下 轉 化 成 * 終 的 黃 色 。 顏 色 的 深 淺 和 樣 品 中 的被檢測物呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度
(OD 值),計算樣品濃度。
樣品收集、處理及保存方法
1.
血清:使用不含熱原和內**的試管,操作過程中避免任何細
胞刺激,收集血液后,3000 轉離心 10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心
地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心 30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心 10 分鐘
取上清。
5.
保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。自備物品
1. 酶標儀(450nm)
2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱操作注意事項
1. 試劑盒保存在 2-8℃,使用前室溫平衡 20 分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,這屬于正?,F象,水浴加熱使結晶完全溶解后再使用。
2. 實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。
3. 濃度為 0 的 S0 號標準品即可視為陰性對照或者空白;按照說明書操作時樣本已經稀釋 5 倍,*終結果乘以 5 才是樣本實際濃度。
4. 嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。5.所有液體組分使用前充分搖勻。
試劑的準備:20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按 1:20 稀釋,即 1 份的 20×洗滌緩沖液加 19 份的蒸餾水
洗板方法
1. 手工洗板:甩盡孔內液體,每孔加滿洗滌液,靜置 1min 后甩盡孔內液體,在吸水紙上拍干,如此洗板 5 次。
2. 自動洗板機:每孔注入洗液 350μL,浸泡 1min,洗板 5 次。操作步驟
1. 從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回 4℃。
2. 設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品 50μ L;
3. 樣本孔先加待測樣本 10μL,再加樣本稀釋液 40μL(即樣本稀釋 5 倍);空白孔不加。
4. 除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶
(HRP)標記的檢測抗體 100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。
5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置 1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板 5 次(也可用洗板機洗板)。
6. 每孔加入底物 A、B 各 50μL,37℃避光孵育 15min。
7. 每孔加入終止液 50μL,15min 內,在 450nm 波長處測定各孔的
OD值
結果判讀
繪制標準曲線:在 Excel 工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應OD 值作縱坐標,繪制出標準品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值。
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯**吸附試驗(ELISA)。往
預先包被抗體的包被微孔中,依次加
入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并徹底洗滌。用底
物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用
下 轉 化 成 * 終 的 黃 色 。 顏 色 的 深 淺 和 樣 品 中 的被檢測物呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度
(OD 值),計算樣品濃度。
樣品收集、處理及保存方法
1.
血清:使用不含熱原和內**的試管,操作過程中避免任何細
胞刺激,收集血液后,3000 轉離心 10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心
地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心 30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心 10 分鐘
取上清。
5.
保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。自備物品
1. 酶標儀(450nm)
2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱操作注意事項
1. 試劑盒保存在 2-8℃,使用前室溫平衡 20 分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,這屬于正?,F象,水浴加熱使結晶完全溶解后再使用。
2. 實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。
3. 濃度為 0 的 S0 號標準品即可視為陰性對照或者空白;按照說明書操作時樣本已經稀釋 5 倍,*終結果乘以 5 才是樣本實際濃度。
4. 嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。5.所有液體組分使用前充分搖勻。
試劑的準備:20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按 1:20 稀釋,即 1 份的 20×洗滌緩沖液加 19 份的蒸餾水
洗板方法
1. 手工洗板:甩盡孔內液體,每孔加滿洗滌液,靜置 1min 后甩盡孔內液體,在吸水紙上拍干,如此洗板 5 次。
2. 自動洗板機:每孔注入洗液 350μL,浸泡 1min,洗板 5 次。操作步驟
1. 從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回 4℃。
2. 設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品 50μ L;
3. 樣本孔先加待測樣本 10μL,再加樣本稀釋液 40μL(即樣本稀釋 5 倍);空白孔不加。
4. 除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶
(HRP)標記的檢測抗體 100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。
5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置 1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板 5 次(也可用洗板機洗板)。
6. 每孔加入底物 A、B 各 50μL,37℃避光孵育 15min。
7. 每孔加入終止液 50μL,15min 內,在 450nm 波長處測定各孔的
OD值
結果判讀
繪制標準曲線:在 Excel 工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應OD 值作縱坐標,繪制出標準品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值。