文章詳情
簡單介紹：
哺乳動物細胞的培養，支原體（Mycoplasma）污染是個世界性的問題。支原體污染幾乎可以改變細胞的所有參數，導致實驗結果的不準確、甚至完全錯誤。從2013年開始，《Nature》期刊已正式要求投稿的文章，如涉及細胞培養都要進行支原體檢測。細胞培養液中支原體污染的檢測通常使用的是PCR法。但是PCR法有明顯的缺點：整個過程大約需要3個小時；由于細胞培養數天后，培養液中經常含有嚴重抑制PCR擴增的代謝物，所以樣品的前處理一般是PCR法不可或缺的環節；PCR法的靈敏度有限，通常需要將培養液離心濃縮或者抽提DNA后再檢測；需要用到PCR儀、電泳槽、凝膠成像儀、離心機等儀器。本試劑盒與PCR方法有明顯的優勢：
1 檢測時間短，整個檢測過程只需30分鐘左右。
2 本試劑盒檢測的是活支原體，只有樣品中存在活的支原體，才會生產陽性結果，可以區分支原體的死活。而一步法支原體檢測試劑盒和PCR法
詳情介紹：
哺乳動物細胞的培養，支原體（Mycoplasma）污染是個世界性的問題。支原體污染幾乎可以改變細胞的所有參數，導致實驗結果的不準確、甚至完全錯誤。從2013年開始，《Nature》期刊已正式要求投稿的文章，如涉及細胞培養都要進行支原體檢測。細胞培養液中支原體污染的檢測通常使用的是PCR法。但是PCR法有明顯的缺點：整個過程大約需要3個小時；由于細胞培養數天后，培養液中經常含有嚴重抑制PCR擴增的代謝物，所以樣品的前處理一般是PCR法不可或缺的環節；PCR法的靈敏度有限，通常需要將培養液離心濃縮或者抽提DNA后再檢測；需要用到PCR儀、電泳槽、凝膠成像儀、離心機等儀器。本試劑盒與PCR方法有明顯的優勢：
1 檢測時間短，整個檢測過程只需30分鐘左右。
2 本試劑盒檢測的是活支原體，只有樣品中存在活的支原體，才會生產陽性結果，可以區分支原體的死活。而一步法支原體檢測試劑盒和PCR法支原體檢測試劑盒都是檢測支原體的DNA，不論支原體的死活，樣品中只要有支原體DNA的存在，就會生產陽性結果，所以無法區分支原體的死活。細胞培養中，*關心的是細胞培養液上清或者血清、胰酶等成分中，是否有活的支原體。而如果僅有死的支原體或者一些殘存的支原體DNA，是無關緊要的。
3 不存在假陽性。由于一步法支原體檢測試劑盒和PCR法支原體檢測試劑盒都需要對支原體DNA進行大量的擴增，檢測過程中，只要有微量的支原體DNA或者擴增產物的污染，就會出現假陽性。而發光法支原體檢測試劑盒只檢測活的支原體，不存在擴增產物污染樣品的問題。
4 不存在因反應被抑制導致的假陰性。由于細胞培養數天后，培養液中經常含有嚴重抑制PCR擴增的代謝物，所以使用PCR法支原體檢測試劑盒經常會出現假陰性的問題。該問題在發光法支原體檢測試劑盒不存在。
5 發光法支原體檢測試劑盒對支原體的識別率極高，近20種細胞培養中出現過的支原體全部含有該酶，所以這些支原體全部可以被發光法支原體檢測試劑盒識別。目前為止，100多種已知的支原體中，只發現這一種支原體不含有該酶，而這種支原體在細胞培養中出現的概率幾乎為零，所以該方法支 原體的識別率應該在99.99%以上。
1 檢測時間短，整個檢測過程只需30分鐘左右。
2 本試劑盒檢測的是活支原體，只有樣品中存在活的支原體，才會生產陽性結果，可以區分支原體的死活。而一步法支原體檢測試劑盒和PCR法支原體檢測試劑盒都是檢測支原體的DNA，不論支原體的死活，樣品中只要有支原體DNA的存在，就會生產陽性結果，所以無法區分支原體的死活。細胞培養中，*關心的是細胞培養液上清或者血清、胰酶等成分中，是否有活的支原體。而如果僅有死的支原體或者一些殘存的支原體DNA，是無關緊要的。
3 不存在假陽性。由于一步法支原體檢測試劑盒和PCR法支原體檢測試劑盒都需要對支原體DNA進行大量的擴增，檢測過程中，只要有微量的支原體DNA或者擴增產物的污染，就會出現假陽性。而發光法支原體檢測試劑盒只檢測活的支原體，不存在擴增產物污染樣品的問題。
4 不存在因反應被抑制導致的假陰性。由于細胞培養數天后，培養液中經常含有嚴重抑制PCR擴增的代謝物，所以使用PCR法支原體檢測試劑盒經常會出現假陰性的問題。該問題在發光法支原體檢測試劑盒不存在。
5 發光法支原體檢測試劑盒對支原體的識別率極高，近20種細胞培養中出現過的支原體全部含有該酶，所以這些支原體全部可以被發光法支原體檢測試劑盒識別。目前為止，100多種已知的支原體中，只發現這一種支原體不含有該酶，而這種支原體在細胞培養中出現的概率幾乎為零，所以該方法支 原體的識別率應該在99.99%以上。